做胚胎著床前染色體快篩，並且做新鮮胚胎植入 qPCR PGS

2015.01.16

 做胚胎著床前染色體快篩，並且做新鮮胚胎植入 qPCR PGS

 
-----聖地牙哥。妙恩(Santiago Munne)
     我們為什麼要做胚胎著床前染色體快篩？
     我們都知道年紀愈大，染色體異常比例愈高，
     小於35歲，胚胎染色體異常的比例為30％；
     35～37歲時，胚胎異常的比例就增加到40％以上；
     41～42歲時，染色體異常的比例增加到80％，
     也就是說，  41～42歲時10個胚胎中有8個是染色體異常的胚胎。
 
這種胚胎染色體異常並不會因為你取到較多的卵子,就會使得染色體異常的比例下降；
同樣的道理，
在42歲這個族群，
1～3顆的囊胚只有13％的染色體正常，
7～14顆也只有14％染色體正常而˙已，
所以我們基於以下五個理由必須要做胚胎著床前快篩：
 
1.至少50％以上的囊胚是染色體異常的、不正常的。
2.隨著年紀增加，胚胎染色體不正常的比例就愈來愈高。
3.年紀是不可逆的，它會影響胚胎染色體異常，而這個會導致胚胎著床困難。
4.我們目前的胚胎著床前基因快篩或染色體快篩，錯誤率小於2％，準確率算很高。
5.在第5天的囊胚期胚胎切片並不會傷到胚胎，也因此PGS只用全染色體的快篩。
 
因此，在囊胚期作胚胎切片染色體快篩有  2  點好處：
1.增加胚胎著床率。
2.可以把年紀所導致較低著床率的這個負面效應因素剔除。
 
而使用胚胎快篩有什麼方法呢？
包括：array-CGH、qPCR、NGS次世代定序。
 
什麼時候做切片呢？
可以在卵子期做極體切片，
也可以在第3天胚胎做胚葉切片，
當然，現階段大部分都是第5天囊胚期切片。
 
首先進行第一個囊胚期胚胎切片有出現肯定訊號的研究論文，
是在2010年˙由克羅拉多的試管嬰兒中心所發表，
他們那時的胚胎切片是送到英國執行分析。
 
第5天胚胎切片有什麼好處呢？
 
1.我們可以拿到較多的胚胎細胞，減少沒˙有訊號的風險。
2.第5天的胚胎比較不會有鑲嵌的情形出現，它的切片錯誤率較低。
3.第5天的胚胎比較不會因為切片而影響著床率，
不像第3天的胚胎切片，一但切下去就會影響39％的著床率。
4.第5天做囊胚期胚胎切片比較不會干擾胚胎的成長。
5.第5天的囊胚期胚胎切片可以讓我們比較有信心做單一胚胎植入子宮。
6.因為等報告要冷凍，這時候的子宮內膜可能較優於接受胚胎著床。
 
但第5天的囊胚期胚胎切片也是有壞處的，
因為某些病人的體質，即使能取到較多顆的卵子，
但受精卵仍然無法長到囊胚期胚胎進行切片。
 
我們發現2002～2013年在一家基因連鎖診所的Reprogentics統計發現，
全世界對於胚胎切片的需求在2002年一整年的統計下來大約只有500個PGS的檢查週期，
到了2011年就飆到降近5000個PGS的週期，
2012年到6000多個，
2013年就快要逼近7000個PGS的週期。
 
顯見使用PGS的人愈來愈多，而且技術方面也從早期能看5個染色體的螢光原位雜交染色法，
進步到2013年的array-CGH第5天囊胚期胚胎切片。
 
所以我們來談一個名詞就是：CCS，
就是全染色體了解性的染色體分析，
 
array-CGH的好處是24個全部染色體都看，
而且它的報告只要16小時，
我们也許第5天胚胎切片，第6天早上10點以前做胚胎植入，
而且不須要每個病人做單一精蟲顯微注射，
 
所以說在驗證方面，在2011年到2013年有4篇研究證明，證明array-CGH在胚胎的準確性，
 
不論是胚胎染色體正不正常，他都有96%到99.5%的正確性，那在各式各樣胚胎染色體的分析裡面，
 
比如說：
 
--qPCR在晚上6點切片隔天早上10點就有報告，
--而array-CGH下午6點切片隔天中午有報告，
--NGS次世代定序在第5天下午6點做切片，第6天天中午有報告，
--比較複雜的是SNP單核甘酸多樣性的中午要做切片，而且要到隔天地6天的下午才有報告，
 
 
在所有報告裡面qPCR的好處就是快，
那array-CGH有時候需要冷凍等報告，
SNP更不用講了，
 
次世代定序全世界還在發展當中，
 
只知道英國威爾斯Wells和美國走在世界的最前端，
ˋ至於說次世代定序也經由驗證方面得到肯定，
整體來說胚胎切片經由染色體快篩已經進入說
PGS 2.0 版了，
它的特色就是囊胚期胚胎切片做全部24個染色體的胚胎檢查，
 
那我們經由第2.0版的PGS，
只要有一個染色體正常
他的胚胎著床率58%、80%、69%，平均大概73%的準確率，
 
這麼高的胚胎著床率就給我們一個非常大的信心，
 
那就是我們允許做胚胎的切片，
 
也因此可以消彌媽媽、女性、年紀大的婦女所帶來胚胎不正常，
所以在一個研究裡面如果沒有做胚胎的切片呢？
 
他的著床率是從30%幾降到10%幾，
可是如果做胚胎切片不論妳哪一個年紀，他的胚胎著床率大概都在50%，胚胎著床之後的流產率隨著年紀增加而增加，
可是如果有做胚胎染色體的分析呢？
這種流產率就不會隨著年紀增加而增加，
可是年紀他的胚胎可能只有1顆、2顆或取不到卵子，這該怎麼辦？
 
這時候我們可以用胚胎銀行Embryo Banking也就是博元婦產科積少成多的撲滿式試管嬰兒，
 
比如說一個年紀大的
她第一次取到2.7顆，
只有0.7顆胚胎染色體正常，
第2次可能只有0.9顆胚胎染色體正常，
第3次再取卵可能只有0.7顆染色體正常，
 
那3次的取卵下來我們就有2顆正常胚胎植入子宮就有機會懷孕，
一個胚胎著床率約50%，
所以對於卵巢功能能不好、卵巢功能不佳、年紀大的婦女，
我們可以累積她的懷孕率，
比方說她42歲，她1到3顆拿到染色體正常只有18%，
如果累積到7到10顆有92%，會遇到胚胎染色體正常，
 
所以有一個研究非常有名，
就是如果這個病人能夠製造一批3個染色體正常胚胎，
那單一個胚胎植入48%左右，
 
他如果可以製造5顆、6顆、7顆以上染色體正常胚胎，那她隨便放一顆著床率是75%，
也就是說一個人體質可以製造染色體較多正常的胚胎呢！
她單一個胚胎就可以贏人家很多，那在所有的年齡群裡面，年紀愈大能夠取到染色體正常比率也就愈低，
比如說35到39歲平均每次取卵可以取到2.5顆，
 
而42歲平均只有1.1顆，因此我們使用撲滿是試管嬰兒有3個要素：
 
(1)病人取卵冷凍不用植入胚胎沒有懷孕再重來，
希望可以減少病人的倦怠感和疲勞感。
(2)不用每次幫病人切片，
病人花費就可以比較便宜，妳知道美國胚胎切片要6000塊美金將近18萬台幣。
 
(3)病人比較願意去嘗試，她只要3次取卵、1次切片、一次PGS1次植入。
 
那到底是要新鮮胚胎植入還是要冷凍植入呢？
 
好像在冷凍胚胎這個族群我們有一個綜合分析發現，
在第5天胚胎植入他的胚胎著床率52%到60%，
可是在第6天胚胎植入呢？
新鮮的只有20%，可是冷凍胚胎有60%，
 
換句話說：冷凍胚胎在第5天第6天他的著床率是沒有差別的，
可是新鮮胚胎在第5天比較高，第6天比較低，
 
那我們要提醒一點就是胚胎著床率，如果單一胚胎植入新鮮胚胎著床懷孕率大概40.7%，而冷凍胚胎是43.8%，
就是如果有不做胚胎切片再去做冷凍胚胎他的繼續懷孕率約60%，如果只有植入一個胚胎的話。
 
 
所以我們結論就是說新鮮胚胎冷凍胚胎成功率既然一樣，
那妳何不用新鮮胚胎讓病人當月就懷孕，
說新鮮胚胎他的好處是當月病人可以得到當媽媽的喜悅。
 
 
至於說胚胎著床之窗，有人認為第6天以前晚上就植入，才不會失去胚胎床之窗，
 
那最後一次黃體素打破卵針當天，
胚胎著床之窗如果在打HCG當天黃體素上升超過1.5，
那胚胎著床之窗可能會關閉，
種情況下你最好把胚胎冷凍起來，
 
那這裡有提到在2013年總共有4359個胚胎著床前基因快篩，
2014年第1季就有1460個，
 
那新鮮胚胎的好處就是第5天胚胎切片，他的著床率相當於第6天植入或者是冷凍胚胎，
而且比較便宜，而且第5天就可以胚胎切片，而且你國外病人也不需要往返出國回國、出國回國這樣兩趟，
 
 
在來當月就可以得到當母親的快樂，
可是壞處就是說如果到第6天胚胎可能需要冷凍，
 
冷凍胚胎也有他的優點第5天植入相當於第6天冷凍胚胎，
第6天胚胎著床率比較好是在冷凍胚胎，如果你是要撲滿式試管嬰兒是必要有冷凍胚胎，冷凍胚胎一般來講子宮內膜接受度比較高，
 
壞處是比較貴，而且比較慢有當媽媽的喜悅，
而且國外的病人要往返兩次或三次，因此目前全球都在進行次世代定序，
新鮮和冷凍胚胎的對比研究，
我們希望在不久的將來能夠做出一個的研究，我也深信將來應該是次世代定序做胚胎快篩，
並且新鮮胚胎植入。